以下由武汉泰特沃斯科技有限公司色谱技术人员主要介绍利用气相色谱仪同时测定食品中植物甾醇和胆固醇含量的分析方法，测定植物甾醇含量较高的常见植物油和同时含有胆固醇及植物甾醇的样品。现如今气相色谱技术已相对成熟，但是国内外相关仪器厂家仍然不断推出性能更稳定、功能更全面、自动化程度更高的气相色谱仪，特别是国产色谱仪的进步更加明显，国产气相色谱仪具有较高的市场占有率，武汉泰特沃斯科技有限公司，是气相色谱仪供应商。

植物甾醇是存在于植物中的一大类化学物质的总称，其化学结构是与胆固醇相似的一类甾体化合物，几乎存在于所有的植物性食物中，常见的包括β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇，其次是这些植物甾醇的饱和形式，即谷甾烷醇和豆甾烷醇等。植物甾醇与胆固醇结构类似，而生理学作用却相差甚远。大量流行病学资料和实验室研究证明，人体血清胆固醇增高，易增加心血管疾病的患病几率。而摄入较多的植物甾醇与人群许多慢性病的发生率较低有关，如降低高胆固醇血症、冠状动脉硬化性心脏病、癌症等疾病的危险性。人体内不能合成植物甾醇，也不能由胆甾醇转化而成，只能由食物中摄取。植物甾醇广泛存在于植物中，在种子、植物油、蔬菜、水果等含量较多。自然界中常见、含量很多的是β-谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、豆甾烷醇等。

目前对胆固醇和植物甾醇的测定方法有分光光度计法、酶法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法等。如比色法样品前处理需要提取样品中的脂肪，且容易受到其他甾醇和甘油三酯的干扰，造成结果的显著偏大。操作繁杂、误差大、重复性差，仅适用于动物性食品。酶法技术含量较高，特异性强，仅适用于动物性食品。液相色谱法采用波长205～210 nm检测，如此低的检测波长使得待测组分不能与实际样品中的基体完全分离，而干扰其准确定量。气相色谱法的选择性较高，分离效果好。气相色谱-质谱法操作复杂，耗费更大。

本实验定量采用内标法，是一种间接、相对的校准方法，通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算，因而在一定程度上能校正和消除操作条件对分析结果产生的影响，提高分析结果的准确度。色谱条件对结果影响不大，准确度、精度较高，可克服进样量的误差对测量结果的影响，比较适用于多成分的测定方法。

因此有必要建立简便、灵敏度和准确度较好的固醇类分析方法，有效分离并测定植物甾醇和胆固醇的含量，对估计居民摄入量有重要意义，也为科学指导居民膳食提供依据。

1 仪器与设备

气相色谱仪（配氢火焰离子化检测器）；万分之一天平；磁力搅拌电热套；旋转蒸发仪、分液漏斗振荡器。

2 方法

2.1 色谱条件

毛细管色谱柱（25 m×0.32 mm，0.17 μm）；氢火焰离子化检测器；升温程序：柱温210 ℃，以12 ℃/min升至300 ℃，保持12.5 min；进样口温度270 ℃；检测器温度280 ℃；氢气流速40 mL/min；空气流速400 mL/min；进样量1 µL；分流比30∶1。

2.2 样品制备

称取适量样品于皂化瓶中，依次加入2.0 mg/mL内标物（5α-胆甾烷）、40 mL体积分数95%乙醇溶液、8 mL质量分数50% KOH溶液，将皂化瓶置于磁力搅拌电热套中，连接冷凝装置，回流冷凝（60±10）min，轻摇试样保证完全皂化。回流冷凝结束后，关闭热源，冷凝管上端加入60 mL体积分数95%乙醇溶液。保持磁力搅拌，15 min后，将皂化瓶从冷凝管移下，冷却至室温。皂化液中加入100 mL乙醚溶液，将溶液转移至500 mL干净的分液漏斗中。加入110 mL 1 mol/L KOH溶液轻轻振摇，待分层清洗后，弃水层。加入40 mL 0.5 mol/L KOH溶液到分液漏斗，轻轻振摇10 s，弃去水层。用40 mL水清洗乙醚层溶液，待分层后弃去水相。反复水洗至少3 次。完成水洗后，将乙醚层从分液漏斗上通过有玻璃棉和20 g无水硫酸钠的玻璃漏斗转移到锥形烧瓶中，并于旋转蒸发仪（55±3） ℃条件下，旋转蒸发至无水。正庚烷5 mL定容，取适量于进样瓶中，上机分析。

2.3 内标溶液配制

精确称取5α-胆甾烷100 mg于50 mL容量瓶，正庚烷溶解定容，得到2.0 mg/mL的内标溶液。

3 数据处理

采用气相色谱法对待测组分进行测定，根据保留时间定性，峰面积定量。以5α-胆甾烷为内标参比计算胆固醇和植物甾醇的含量。

本实验优化了样品前处理条件，利用气相色谱仪，采用毛细管色谱柱对胆固醇和植物甾醇进行分离，内标法定量。研究结果显示在同时含有植物甾醇和胆固醇的样品中，应用此方法能够将其进行良好的分离及定量，且胆固醇和植物甾醇各组分的线性及回收率结果良好。数据结果表明在常见植物油中一般不含胆固醇或含量很低；植物甾醇总含量高的是玉米油，其次是树莓籽油、米糠油、菜籽油；植物甾醇分布方面通常是β-谷甾醇含量高，其次是菜油甾醇。

该方法相较于液相色谱法以及气相色谱-质谱法能有效将胆固醇和植物甾醇进行分离，具有步骤简单、重复性好、准确度和灵敏度高等特点。