色谱理论塔板数(有效率)和分离度的测定
理论塔板数(N),色谱的柱效参数之一,(简称柱效)。N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。
分离度又称分辨率,为了判断分离物质对色谱柱在色谱柱中的分离情况。常用分离度作为柱的总分离效能指标,用R表示。R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。
以分析由硬脂酸甲酯和油酸甲酯按当量比例组成的混合物(例如,由可可脂制得的甲酯)为例。合理选择进样量、柱温和载气流量,使硬脂酸甲酯峰的最大值在溶剂峰出现后15min内出现且达到满标的3/4。见图1
图1 理论塔板数(有效率)和分离度的测定
理论塔板数有效率由下式计算
分离度的计算
式中:
n——理论塔板数;
R——分离度;
S——保留距离,mm,从色谱图起点到硬脂酸甲酯最大峰间的距离;
w1——硬脂酸甲酯的峰宽,mm,是从曲线两个拐点作切线与基线的交点间的距离;
w2——油酸甲酯的峰宽,mm,是从曲线两个拐点作切线与基线的交点间的距离;
Y——硬脂酸甲酯与油酸甲酯最大峰间的距离,mm。
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