以下是在色谱柱使用中最容易忽略的核心问题，这些隐患可能导致柱效下降、数据失真甚至色谱柱报废，需特别注意：

一、流动相处理不当

未过滤颗粒物

流动相中的微粒杂质会堵塞柱头筛板，导致柱压异常升高。需使用0.22/0.45 μm滤膜过滤，尤其水相缓冲盐溶液更易析出结晶颗粒。

未脱气的有机相

溶解的微小气泡进入色谱柱会破坏固定相结构，造成峰形分叉或基线噪音。建议采用超声脱气或在线脱气机。

二、色谱柱操作禁区

突破pH耐受极限

反相C18柱典型耐受范围为pH 2-8，强酸/碱环境会溶解硅胶基质导致柱床塌陷。需注意：

含缓冲盐的流动相需控制pH在填料标注范围内。

冲洗时避免直接从高有机相切换到纯水相（易析出盐结晶）。

温度骤变损伤固定相

强极性柱（如WAX、FFAP）对温度敏感：

升温速率需≤10℃/min，程序升温后需缓慢降温。

气相色谱柱超温使用会加速固定相流失，导致基线漂移。

三、样品处理致命疏忽

未净化复杂基质样品

血浆、组织提取液等含蛋白质/脂类样品会不可逆吸附在柱头，表现为保留时间漂移、峰拖尾。建议：

强制搭配保护柱（需与分析柱填料匹配）。

生物样品需经蛋白沉淀/固相萃取预处理。

错误清洗与保存

盐残留结晶：含缓冲盐流动相使用后未用5%甲醇水冲洗，直接保存会导致盐析堵柱。

微生物滋生：水相保存时未添加20%甲醇，长菌后堵塞筛板。

强溶剂冲击：反相柱突然切换正相溶剂（如正己烷）会导致键合相脱落。

四、维护盲区警示

气体纯度不足：气相色谱载气含氧时，高温下会氧化破坏极性柱固定相，需定期更换三合一过滤器（氧气指示剂变灰即失效）。

反向冲洗风险：仅有约60%色谱柱允许反冲，强冲洗可能造成填料层塌陷。

五、数据拯救方案

若已出现柱压升高、峰拖尾等问题：

柱头污染：切除柱前段0.5-1 cm填料，重新装填筛板。

固定相损伤：用20倍柱体积的梯度溶剂（从弱到强）再生清洗，强极性柱可用0.1%三氟乙酸-乙腈混合液冲洗。

建议新手建立「流动相-样品-柱温」三联检查清单，并定期进行柱效测试。