高效液相色谱法（HPLC）在药物分析中的应用主要是鉴别相关物质、检查药物中有关物质的含量限度，测定有效成分或主要成分含量。HPLC法在天然药物分析、合成药物分析，尤其是化学成分复杂的药物的分析，都具有非常广泛的应用。

1、在药物鉴别中的应用

在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别，在中国药典中就有大量的药物采用此法进行鉴别。随着高效液相色谱技术的发展和在药典中的重要性不断提高，出现了一些采用高效液相色谱法鉴别药物的新方法。例如，克拉霉素、利福平滴眼液、岗梅等7种冬青属中草药、南北五味子的鉴别。这无疑为进一步完善、开发药物鉴别的方法提供了一种新的思路。

2、在杂质检查中的应用

历年来各国药典中收载了多种药物采用HPLC法进行杂质检查的方法，并且可采用HPLC法进行杂质检查的药物种类在逐年颁布的药典中有所增加。随着HPLC技术的不断发展，有不少国内外药物分析工作者研究和探讨了HPLC法在药物的有关物质检查方面的应用，并建立了一些新方法。例如，盐酸噻吩诺啡、奥沙西泮原料药及其片剂、盐酸喹那普利原药、氟他胺中有关物质的检查。这些方法简便、可行且专属性较强。

3、在含量测定中的应用

用高效液相色谱法测定合成药及其制剂的含量，可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存药物的干扰。此外，国内还对醋酸可的松滴眼液、喹诺酮类抗菌药、芩连口服液中黄芩苷、氢溴酸右美沙芬片、注射用硫酸奈替米星等药物的HPLC测定方法进行研究。天然药物的化学成分复杂，其有效成分可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标准来说比较困难。例如，罗汉果种类较多，结构相似，其定量分析方法现普遍应用的仍主要为比色法，但误差较大、结果不准确。陈维军等建立了罗汉果皂苷的HPLC分析方法，可用于罗汉果皂苷提取物中皂苷成分的分析。丹七片由丹参、三七两味药材加工而成，收藏于卫生部部颁标准，其主要成分为丹参酮，但无含量测定方法。谭生建立了用HPLC法测定丹七片中丹参酮含量的方法。复方制剂各组分之间具有协同作用，其质量控制较难，故药典上很少收载。近年来高效液相色谱在这方面的工作报道较多。例如，复方鱼腥草片中的黄芩苷含量的测定，牙周康胶囊中的甲硝哇和芬布芬的同时测定，烧烫灵软膏中磺胺醋酞钠和磺胺的含量的快速测定，复方感冒片中那可汀的含量测定，均取得了理想的效果。